1.標本的采取和保存
可用作 ELISA測定的標本十分廣泛體液(如血清)、分泌物(唾液)和排池物(如尿液、業(yè)便)等均可作標本以測定其中某種抗體或抗原成有些標本可直接進行測走(如血清、尿液),有些則需經(jīng)預(yù)處理(如龔便和某些分泌物)。大部分 ELISA檢測均以血清為標本。血漿中除尚含有除特殊情況外,在醫(yī)學檢驗中均以血清作為檢測標本。在 ELISA中血漿和血清可血清標本可按常規(guī)方法采集應(yīng)注意避兔溶血細胞溶解時會釋放出具有過氧化物酶活性的物質(zhì)以HRP為標記的 ELISA;測定中,溶血標本可能會增加非特異性顯色。
2.試的淮備:
按試劑盒說明書的要求注備實驗中需用的試劑。 ELISA中用的蒸餾水或去離子水包括用于洗滌的應(yīng)為新鮮的和高質(zhì)量的。自配的中液應(yīng)用pH計測量較正。從冰箱中取出的試驗用試剤應(yīng)待溫度與室溫平衡后使用。試剤盒中本次試驗不需用的部分應(yīng)及時放回冰箱保存
在 ELISA中一般有3次加樣步聚,即加標本,加加酶結(jié)合物加底物。加樣時應(yīng)將所加物加在 LEISA板孔的底部避兔加在孔壁上
出不可產(chǎn)生氣泡。加標本一般用微量加樣器按規(guī)定的量加入板孔中。毎次加標本應(yīng)更換吸嘴以兔發(fā)生交叉污染也可用一次性的定量塑料管加加樣。有此測定(如司接法EISA)需用稀釋的血清,可在試管中按規(guī)定的稀釋度稀釋后再加樣。也可在板孔中加入稀釋液再在其中加入血清標本然后在微型震蕩器上震蕩1分鐘以保證混和。加酶結(jié)合物應(yīng)用液和底物應(yīng)用液時可用定量多道加液器使加液過程迅速完成。
4、保溫:
在 ELISAI中一般有兩次抗原抗體反應(yīng)即加標本和加加結(jié)合物后?？乖贵w反應(yīng)的完成需要有一定的溫度和時間這一保溫過程稱為溫育(iulation),有人稱之為孵育,在 ELISA中似不恰當。 ELISA固相兔疫測定抗原、抗體的結(jié)合只在國相表面上發(fā)生。以抗體包被的夾心法為逐步平衡的過程因此需經(jīng)擴散才能達到反應(yīng)的終點。在其后加入的毎標記抗體與同相抗原的結(jié)合也同樣如此。這就是為什么 ELISA反應(yīng)總是需要一定時間的溫育。
5.洗淙:
洗滌在 ELISA過程中雖不是一個反應(yīng)步張但卻也決定著實驗的成敗。 ELISA是靠洗滌來達到分離游離的和姞合的標記物的目的。通過洗以清除殘留在板孔中沒能與固相抗原或抗體結(jié)合的物質(zhì)以及在反應(yīng)過程中非特異性地吸附于固相。
ATP結(jié)合蛋白家族6抗體
三磷酸腺苷結(jié)合盒亞家族G1抗體
脂聯(lián)素受體2抗體
ANGEL1蛋白抗體
ANGEL2蛋白抗體
ANKLE2蛋白抗體
睪丸特異性錨樣蛋白1抗體
錨蛋白重復(fù)結(jié)構(gòu)域蛋白13B抗體
錨蛋白重復(fù)結(jié)構(gòu)域蛋白20A1抗體
錨蛋白重復(fù)結(jié)構(gòu)域蛋白20A3抗體
錨蛋白重復(fù)結(jié)構(gòu)域蛋白22抗體
錨蛋白重復(fù)結(jié)構(gòu)域蛋白50抗體
氫離子轉(zhuǎn)運ATP合成酶6G抗體
錨蛋白重復(fù)結(jié)構(gòu)域蛋白26抗體
錨蛋白重復(fù)結(jié)構(gòu)域蛋白26抗體
丙型肝炎病毒核結(jié)合蛋白-1抗體
芳香基硫酸酯酶K抗體
神經(jīng)元突觸前膜蛋白抗體
錨定蛋白G抗體
肌動蛋白α/α-SMA/α Actin抗體